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北京東迅:細胞計數板的計數事項及注意點

發布日期: 2022-04-20
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  細胞計數一般用血細胞計數板,按白細胞計數方法進行計數,便于確定細胞的生活狀況。在細胞培養工作中,常需要了解細胞生活狀態和鑒別細胞死活,確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度,如用酶消化制備的細胞懸液中細胞活力的鑒別,凍存細胞復蘇后的活力檢測等。
 

Nageotte計數板

 

  細胞懸液制備后,常用活體染料臺盼藍對細胞進行染色,進行細胞計數。臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色(藍色)。
  細胞懸液細胞數/ml=4個大格細胞總數/4×10,000。如計數前已稀釋,可再乘稀釋倍數。
  計數時,只計數完整的細胞,若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。在一個大方格中,如果有細胞位于線上,一般計下線細胞不計上線細胞,計左線細胞不計右線細胞。二次重復計數誤差不應超過±5%。鏡下觀察,凡折光性強而不著色者為活細胞,染上藍色者為死細胞。
  注意事項:
  1.務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。
  2.顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。
  3.置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數。
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